还在纠结western blot的条带不好看吗?你需要的是一个更简单有效的检测方法! | 您所在的位置:网站首页 › western blot 有两个条带结果还准确么 › 还在纠结western blot的条带不好看吗?你需要的是一个更简单有效的检测方法! |
Western blot作为科研中最基础的实验,广泛应用于蛋白表达水平的检测,同时也是评估蛋白磷酸化状态最常用的方法。 但是在实际操作中,好看的结果往往不是那么容易得到的: » 条带形状各异,或 “︵” 或 “︶” 或 “拖尾” ...... » 背景太高 » 信号弱或者没有信号 » 出现黑点或黑斑 ...... ![]() 即使是经验丰富的“老手”依然会遇到这些问题,导致实验结果不可用还得重头再来。 那么有没有其他的实验方法,既能够做到对大多数蛋白进行半定量检测,同时又具有高灵敏的检测能力,简单且不费力呢? Cell-based ELISA(基于细胞的ELISA)技术的应用刚好能解决小伙伴们的需求。
Cell-based ELISA介绍 Cell-based ELISA也称为Cell-ELISA或In-Cell ELISA, 是一种基于细胞的ELISA检测方法,可原位检测细胞蛋白的相对水平。该技术起源于1982年英国伯明翰大学的实验室,而后经过发展以及改进,越来越受到科研用户的青睐,目前使用该技术进行检测的文献已有1000多篇。 对激酶的假说验证和药物筛选实验,常用的检测方法有western blot、ELISA等,但是它们无法模拟细胞内的环境。而Cell-based ELISA则能在真实的细胞状态下测定蛋白磷酸化,从而更加准确地代表特定信号通路的状态,因此能在蛋白磷酸化检测中获得更好的效果。
Cell-based ELISA原理 将细胞种到96孔板上,然后对细胞进行固定透化(方便抗体进入细胞内), 接着加入一抗二抗孵育、显色,最后测量信号。 目前检测体系分为: 1、比色法测定(酶标仪)检测; 2、荧光显色测定(荧光读板机/荧光酶标仪)。 检测原理分别如下图所示: ![]() 图1. 比色法测定 ![]() 图2. 荧光显色测定
优势 1、简便省时省事,无需制备细胞裂解液。可部分替代western blot; 2、可高通量分析检测,灵敏度相比western blot要高; 3、对于磷酸化蛋白研究,可同时检测磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白水平,实现磷酸化蛋白水平的准确评估,结果更可靠。 接下来我们分享一个Cell-based ELISA应用的案例,该篇文章于2019年发表在(IF=16.959)杂志上[1]。![]() Cell-based ELISA检测LNCaP和PC3细胞中ERK1/2的活性和总水平。 分别用不同的药物对两个细胞进行处理,然后通过Cell-based ELISA分别读出p-ERK1/2和总ERK1/2的表达水平。再对细胞进行结晶紫染色,读出吸光度,确定每孔中细胞的相对数量,最后将p-ERK1/2与总ERK1/2的比值与每孔细胞密度归一化,得出上图结果。
![]() 公司简介 Assay Genie公司成立于伦敦的生命科学试剂公司,该公司主要提供各种抗体,检测试剂盒,ELISA试剂盒等。旨在为科研工作者提供更多的检测指标,帮助他们探索科学研究。 目前Assay Genie可提供1600多种磷酸化蛋白的Cell-Based ELISA检测试剂盒,700多种普通蛋白的Cell-Based ELISA检测试剂盒。 Cell-Based ELISA的热销指标 ![]() ![]() 全国客服热线|400-7060-959 欲了解更多相关的检测试剂盒, 欢迎与我们联系。
参考文献: [1] El Haibi CP, Sharma PK, Singh R, et al. PI3Kp110-, Src-, FAK-dependent and DOCK2-independent migration and invasion of CXCL13-stimulated prostate cancer cells. Mol Cancer. 2010;9:85. Published 2010 Apr 22. doi:10.1186/1476-4598-9-85
|
CopyRight 2018-2019 实验室设备网 版权所有 |